В последние годы наряду с хорошо известным антимикробным воздействием прополиса, стали поступать сообщения и о его противовирусных свойствах.
В проведенных нами опытах мы попытались выявить противовирусное, точнее говоря охраняющее воздействие прополиса и перги в случае вирусного (гриппозного) заражения мышей. Хотя первые результаты были многообещающими, они еще недостаточны для окончательных выводов, имея в виду масштабы опыта, которые не позволяют еще дать ответ на такие вопросы, как оптимальная доза, способы и время применения этого вещества.
Мы проводили свои опыты в трех направлениях :
1. Лечение мышей путем тотального введения через нос и внутрибрюшинно навесок из прополиса и перги, до того как подвергнуть их гриппозному заражению (профилактическое воздействие).
2. Дача прополиса с пергой через 24 часа после гриппозного заражения (у животных клинических изменений не наблюдается), за которой следуют 3 ежедневных дачи небольших доз.
3. Выявление вирусных ингибиторов в сыворотке мышей, инокулированных внутрибрюшинно навесками из прополиса и перги.
В нашем опыте мы использовали в качестве веществ с противовирусным воздействием прополис и пергу. Для растворения этих двух веществ мы использовали 10-процентный раствор диметилсульфоксида (ДМСО, фирма Шушар).
По литературным данным ДМСО в концентрации 70% нетоксичен для человека и животных, увеличивает приспособляемость тканей и является хорошим переносчиком целого ряда медикаментов.
Один грамм каждого вещества растворяли в 10 мл ДМСО : в случае прополиса получали темно-коричневый раствор, а в случае перги —желтый раствор с небольшим осадком. Дополняли до 100 мл буферным фосфатом рН 7,2. Препарат из прополиса выглядел как молочная, мутная, труднооседающая жидкость, а препарат из перги, как более прозрачная молочная жидкость, образующая преципитат. Навески хранили при +4°С, а перед употреблением взбалтывали.
Для контрольного заражения использовали гриппозный вирус с заражающим титром ЛД50, который вводили белым мышам через нос по 16—18 г.
Навеска из прополиса в 1 г на 100 мл ДМСО 10% оказалась нетоксичной для мышей, хотя в ряде опытов при введении одного мл суспензии внутрибрюшинно наблюдали смертность в 30%. Меньшие дозы мыши переносили лучше. Суспензии из перги они переносили еще лучше. Смертности не наблюдалось даже после внутрибрюшинного введения 1 мл суспензии.
Результаты
Для внутриносового введения суспензий из перги и прополиса использовали слабые растворы (1/250) так как суспензии в 1/100 вызывали нарушения в дыхательных путях мышей. Через 1 ; 3 и 5 дней производили контрольное заражение гриппозным вирусом APR8 в растворах 10 ЛД50 и 100 ЛД50.
Между мышами необработанной контрольной группы и мышами, которым давали суспензии из перги и прополиса большой разницы не наблюдали. Следует отметить, что и количество активного вещества было небольшим, менее 0,5 мг/мышь. Суспензии из перги и прополиса вводили внутрибрюшинно в количествах 0,2, 0,6 и 1 мл, а через день и затем через 7 дней животных подвергали контрольному заражению гриппозным вирусом APR8 в растворах 10 ЛД50 и 100 ЛД50. Наибольший процент выживания отметили у мышей, которым давали 0,6 мл
внутрибрюшинно, а контрольное заражение производилось 7 дней спустя после дачи перги и прополиса (таблица 1).
Мышей заразили 10 ЛД50 гриппозным вирусом APR50, а 24 часа спустя произвели 3 внутрибрюшинных введения через день — 0,2 и 0,4 мл, а другой группе мышей трехкратно давали по 0,5 мл суспензии из перги и прополиса. Наибольший процент выживания установили у мышей, которым в течение трех дней давали по 0,4 мл суспензии внутрибрюшинно.
Таблица 1
ВОЗДЕЙСТВИЕ ПРОПОЛИСА И ПЕРГИ НА ЗАБОЛЕВАНИЕ ГРИППОМ ПРИ ДАЧЕ ПРЕПАРАТА ДО ЗАРАЖЕНИЯ
Продукт | Количество в мл | Промежуток времени через который давали контрольный вирус | Незаражен- ный, выживший контроль | % животных, которые выжили после контрольного заражения |
10 ЛД50 | 100 ЛД50 |
Гриппозный вирус АРR8 | 3 капли через нос | | | 10 | 0 |
ДМСО 10% | 1 | — | 100 | — | — |
ДМСО 10% | 1 | 24 ч | — | 100 | 100 |
Суспензия из перги | 0,2 | 24 ч | 100 | 20 | _ |
1 | 24 ч | 100 | 30 | 10 |
0,6 | 7 дней | 100 | 50 | 50 |
Суспензия из прополиса | 0,2 | 24 ч | 100 | 10 | — |
1 | 24 ч | 70 | 30 | 0 |
0,6 | 7 ч | 100 | 50 | 30 |
Группе из 10 мышей вводили внутрибрюшинно по 1 мл суспензии из перги и прополиса. 5 дней после инокулирования у них брали кровь, а полученную сыворотку тестировали на присутствие вирусных ингибиторов к заражению гриппозным вирусом АРR8. До применения сыворотки выдерживали при температуре 50°С.
Таблица 2
ВОЗДЕЙСТВИЕ СУСПЕНЗИЙ ПЫЛЬЦЫ И ПРОПОЛИСА ПОСЛЕ ГРИППОЗНОГО ЗАРАЖЕНИЯ
Продукт | Количество в мл | Способ применении | % животных, выживших после заражения 10 ЛД50 |
Гриппозный вирус | 3 капли | через нос | 20 |
Суспензия из перги | 0,2 0,4 0,5 | внутрибрюшинно внутрибрюшинно через рот | 50 70 40 |
Суспензия из прополиса | 0,2 0,4 0,5 | внутрибрюшинно внутрибрюшинно через рот | 50 50 60 |
В таблице 2 указан процент животных, выживших после заражения 10 ЛД50, которым за 24 часа перед этим вводили через нос сыворотку мышей, инокулированных суспензиями перги и прополиса.
Воздействие этих же препаратов, применяемых в течение двух дней через нос и внутрибрюшинно, начиная через сутки после заражения мышей 10 ЛД50 и гриппозным вирусом АРR8, убедительно показывает, что при этом у мышей наблюдался наибольший процент выживаемости.
Обсуждение
Мыши хорошо переносят суспензии 1% прополиса и перги в 10% ДМСО, вводимые внутрибрюшинно и через рот. Вводить их через нос труднее из-за вязкости суспензий. Можно испытать другие растворители или увеличить процент ДМСО. Применение суспензий внутрибрюшинно обеспечивает больший процент выживаемости, когда контрольное заражение производят через 7 дней, и значительно более низкий, если мышей заражают на следующий день после дачи суспензий из прополиса и перги. У мышей, зараженных гриппозным вирусом АРR8 ( 10 ЛД50), и подвергнутых лечению через день после этого в течение трех дней суспензиями перги и прополиса внутрибрюшинно и через рот, наблюдался высокий процент выживаемости по сравнению с контрольной группой, оставленной без лечения.
Кровяные сыворотки, полученные от мышей, инокулированных внутрибрюшинно прополисом и пергой, обеспечивают высокий процент выживаемости по сравнению с контрольной группой, зараженной 10 ЛД50 гриппозного вируса АРR8, что наводит на мысль о том, что эти вещества вероятно способны индуцировать вирусные ингибиторы, механизм которых аналогичен интерферону. Чтобы доказать это, необходимы специальные исследования как на животных, так и на клеточных культурах. Так как наши исследования еще не окончены, очевидно некоторые из приведенных результатов еще претерпят изменения и будут уточнены.
В. ЖУКУ, Т. ГЭДОЮ РОДИКА БАБИИ, ЕЛЕНА ПАЛОШ РУМЫНИЯ